GOPHERSPACE.DE - P H O X Y
gophering on origin.rxivist.org
               _____          _         _       _
              |  __ \        (_)       (_)     | |
              | |__) |__   __ _ __   __ _  ___ | |_
              |  _  / \ \ / /| |\ \ / /| |/ __|| __|
              | | \ \  \ v / | | \ V / | |\__ \| |_
              |_|  \_\  > <  |_|  \_/  |_||___/ \__|
                       / ^ \
                      /_/ \_\
                      TRENDING OPEN SCIENCE
-------------
Real-time luminescence assay for cytoplasmic cargo delivery of
extracellular vesicles
--------
By
  Masaharu Somiya
  Shun'ichi Kuroda

DOI: 10.1101/2020.10.16.341974

On bioRxiv: https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2020.10.16.341974v2

Extracellular vesicles (EVs) have been considered to deliver
biological cargos between cells and mediate intercellular
communication. However, the mechanisms that underlie the biological
process of EV uptake and cytoplasmic cargo release in recipient cells
are largely unknown. Quantitative and real-time assays for assessment
of the cargo delivery efficiency inside recipient cells have not been
feasible. In this study, we developed an EV cargo delivery (EVCD)
assay using a split luciferase called the NanoBiT system. Recipient
cells expressing LgBiT, a large subunit of luciferase, emit
luminescence when the EV cargo proteins fused with a small
luminescence tag (HiBiT tag) that can complement LgBiT are delivered
to the cytoplasm of recipient cells. Using the EVCD assay, the cargo
delivery efficiency of EVs could be quantitatively measured in real
time. This assay was highly sensitive in detecting a single event of
cargo delivery per cell. We found that modification of EVs with a
virus-derived fusogenic protein significantly enhanced the cytoplasmic
cargo delivery; however, in the absence of a fusogenic protein, the
cargo delivery efficiency of EVs was below the threshold of the assay.
The EVCD assay could assess the effect of entry inhibitors on EV cargo
delivery. Furthermore, using a luminescence microscope, the
cytoplasmic cargo delivery of EVs was directly visualized in living
cells. This assay could reveal the biological mechanism of the cargo
delivery processes of EVs.

---
RANKS:
952 downloads all time
  - Overall rank: 21044
  - Rank in cell-biology: 742


______________________________________________________________________
                                          Served by Flask-Gopher/2.0.0